周素娣 仲惠娟
中国药科大学　南京　210009

摘要：报道反相HPLC测定西红花提取物及其片剂中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷的含量，Spherisorb 5 ODS柱(150mm×4.6mm)，配预柱的Waters在线过滤器，流动相为甲醇—水(55:45)，检测波长为440nm，室温，流速 1.0ml/min，纸速0.5cm/min。加样回收率：西红花提取物中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及其总苷分别为103.3%、99.3%、 100.4%。各自的RSD(%)顺次为3.2、3.7、1.7(n＝9)；西红花多苷片模拟片中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及其总苷分别为98.4%、 101.7%、99.8%。其RSD(%)分别为1.5、1.1、2.0(n=6)。本法分离度好，精密准确，可用于控制西红花提取物及其制剂的质量。

关键词：西红花　西红花苷　西红花多苷片　HPLC

    西红花为茑尾科植物番红花(Crocus sativus L.)的干燥柱头。又名藏红花，是一味久负盛名的中药。

    西红花中主要含西红花苷类化合物，即西红花酸(Crocetin)与不同糖基结合的一系列酯苷，西红花苷-Ⅰ是主要成分，其余为西红花苷-Ⅱ、西红花-Ⅲ及西红花苷-Ⅳ等。
西红花苷定量分析方法有对比法^［1］、比色测定^［2］、分光光度法^［3］、薄层扫描法^［4］及高效液相色谱法^［5］等。本文建立了以西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ为对照品，甲醇—水(55:45)作流动相，可见—紫外分别检测各种西红花苷的反相高效液相色谱法，用于其提取物及片剂的含量测定，方法准确，回收率好。

1　仪器与色谱条件
    Varian 5060型HPLC(美国)配Waters 490紫外—可见分光光度检测器(美国)和Varian Vis TA-401色谱数据系统。色谱柱：Spherisorb 5 ODS柱(150mm×4.6mm)，配预柱的Waters在线过滤器，流动相：甲醇—水(55∶45)，流速：1.0mL/min，室温，检测波长：440nm。

2　药品及试剂
    西红花苷-Ⅰ及西红花苷-Ⅱ对照品(从西红花中提取分离精制，经紫外、红外、核磁共振鉴定。HPLC法测定含量均为98%以上)，西红花提取物及西红花多甙片(均为上海某制药厂)。重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。西红花苷-Ⅲ、Ⅳ均从西红花中自制，TLC一个斑点。

3　测定波长的选择
    分别作西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、西红花提取物及其西红花多甙片紫外—可见吸收曲线，λmax为(432±2)nm及(458±2)nm。高效液相色谱法按文献^［5］波长440nm测定，结果满意。

4 测定各组分的保留时间及分离度
    在上述条件下，分别精密称取西红花苷-Ⅰ 5.0mg、西红花苷-Ⅱ 4.9mg、西红花苷-Ⅲ 5.2mg、西红花苷-Ⅳ 10mg，置10mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。各取上述溶液适量置10mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，混匀，进样10μL，测定，各峰之间的分离度均大于1.5，见表1。

表1　系统适应性试验结果

    5　线性及精密度测定
    线性关系：精密吸取西红花苷-Ⅰ及西红花苷-Ⅱ贮备液各适量，分别逐级稀释，配成系列标准溶液，进样量均为10μL，结果回归方程分别为：
    Y＝3.014×10⁷X-6.019×10⁵
    r＝0.9999
    Y＝3.460×10⁷X-1.612×10⁵
    r＝0.9999  西红花苷-Ⅰ及西红花苷-Ⅱ在0.10～5.0mg范围内有良好的线性关系。

    日内精密度结果：取合适浓度的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷对照品溶液，每隔1h进样10μL，各重复进样9次，测定相应峰面积，其RSD(%)分别为1.5、1.6、1.6。
    日间精密度：每天测1次，共6d，分别测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷的RSD(%)依次为1.9、1.8及2.0。

    6　回收率试验
    6.1　加样回收率　精密称取已测定含量的西红花提取物供试品适量，分别加入不同量的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ及西红花总苷对照品，照含量测定项下方法测定，结果回收率(n=9)分别为103.3%、99.3%、100.4%，RSD为3.2%、3.7%、1.7%。
    6.2　模拟片回收率　按处方配制模拟片3批，精密称取适量(约相当于西红花提取20～25mg)，同上法分别加不同量的各对照品，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声15min，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液，照含量测定项下方法测定，结果回收率(n=6)分别为98.4%、 101.7%、99.8%，RSD为1.5%、1.1%、2.0%。

    7　样品测定
    7.1　西红花提取物的测定
    对照品溶液的制备：分别精密称取在硅胶干燥器中干燥的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品各5.0mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使全溶，加甲醇至刻度，混匀，进样10μL。
    供试品溶液的制备：精密称取在干燥器中干燥供试品约20mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使全溶，加甲醇至刻度，混匀，进样10μL。
    由于直线均通过零，以一点外标法测定并计算含量。以西红花苷-Ⅰ对照品为标准，测定供试品中西红花苷-Ⅰ、西红花总苷含量，另以西红花苷-Ⅱ对照品为标准，测定供试品中西红花苷-Ⅱ含量。结果见表2。

表2　样品含量测定结果(%)

     7.2　西红花多甙片的测定
    对照品外标溶液同“7.1”项下，取10μL注入液相色谱仪。
    供试品溶液的配制：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于西红花提取物20mg)，置10mL量瓶中，加甲醇适量，超声15min，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪。照西红花提取物项下的方法测定，计算西红花苷-Ⅰ、总苷及西红花苷-Ⅱ的含量。结果见表2。

参考文献

1 贾宗才.番红花的质量考察.中药通报，1984，9(2)：11
2 木村雄四郎等.生药の规格设定に关すろ研究(第I报)サフラン中α-クロチンの新微量定量法.药学杂志，1953，73(4)：25
3 周素娣.分光光度法测定西红花多甙片中西红花总甙含量.海峡药学，1997，9(2)：3
4 金蓉鸾等.番红花质量研究.南京药学院学报，1986，17(4)：247
5 Pfander H,et al.Separation of crocetin glycosyl esters by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr,1982,234:443

(本文于1997年5月29日收到)

HPLC Determination of Crocin-Ⅰ,Crocin-Ⅱ and Crocins in Croucus Sativus Extract and Tablets

Zhou Sudi and Zhong Huijuan
(China Pharmaceutical University,Nanjing,210009)

　　Abstract:This paper reports a reversed phase high performance liquid chromatographic method to determine crocin-Ⅰ、crocin-Ⅱand crocins in extract and tablets.The experimental conditions of HPLC were as follows:Spherisorb 5 ODS column(150mm×4.6mm)with on-line filter with Guark-column,mobile phase:methanol-water(55:45)，detection wavelength 440nm,flow-rate 1.0mL/min,paper feed-rate 0.5cm/min.The recovery of the method:crocin-Ⅰin crocus extracts was 103.3%(RSD＜3.2%),crocin-Ⅱ in crocus extracts was 99.3%(RSD＜3.7%),crocins in crocus extracts was 100.4%(RSD＜1.7%)(n=9).Crocin-Ⅰ in crocins tablet 98.4%(RSD＜1.5%),crocin-Ⅱ in crocins tablet was 101.7%(RSD＜1.1%),crocins in crocins tablet was 99.8%(RSD＜2.0%).The resolution of this method is fine and accurate.It provides a means for the control of crocus extracts and tablets.
Key words:Crocus sativus L.,crocin-Ⅰ,crocin-Ⅱ,crocins tablets,HPLC

(整理编辑：中国藏红花网)